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SARS-CoV-2 假病
假病毒描述：
SARS-CoV-2假病(bing)毒以HIV病(bing)毒为骨架(jia)，外面包被SARS-Cov-2的 Spike 蛋白(bai)，能(neng)够感染过表达人ACE2的细(xi)胞。可(ke)用于测(ce)试研究(jiu)阻断病毒侵入的中(zhong)和抗体或其它药物。假病毒只能(neng)单(dan)次感(gan)染，不能(neng)复制(zhi)，安全性高(gao)，可(ke)在P2级实验室使用(yong)。
假病(bing)毒(du)参数：
产(chan)品名称 | SARS-CoV-2 假病毒 |
货号 | VS-SC-0001 |
荧(ying)光基团 | eGFP和Luciferase |
生物安全防护措施 | P2级实验室(shi) |
包装 | 100~200ul |
感染滴度(du) | 2×105 TU*（基(ji)于hACE2-COS7细胞） |
拷贝数 | ＞108 |
保存 | -80℃ |
* TU（transfection unit），1TU=使1个细胞发出绿色荧光。
假病毒制备：
维通达将Spike蛋白表达质粒(li)、包装(zhuang)质粒(li)、转移质粒(li)共转染到293T细胞内(nei)，包装(zhuang)出以SARS-CoV-2-Spike为表面衣壳蛋白的假病毒。假病毒同时带(dai)有Firefly Luc和eGFP标记，可(ke)以通过(guo)有Firefly Luc和eGFP检测感染。示意图如下：
注意事(shi)项：
1) 病毒使(shi)用(yong)PEG8000浓(nong)缩(suo)，会有(you)血清蛋白(bai)沉淀，外观浑浊，但不(bu)影响(xiang)使用。
2) 病(bing)毒干冰运(yun)输，-80℃保存，使用前室温融化。
使(shi)用方(fang)法：
1. 第一天，96孔(kong)(kong)板(ban)每孔(kong)(kong)接种5×103个(ge)hACE2-COS7细胞。
2. 第二(er)天，除去培(pei)养(yang)板里的(de)培(pei)养(yang)基，新鲜培(pei)养(yang)基（100ul/孔）与假病毒(du)2×103 TU和Polybrene混合（5ug/ml终浓度(du)），加入培养孔，培养板离心（1200g x 2 Hour，4℃）。
（2×103 TU时(shi)，luciferase的亮度约为1×106）。
3. 离(li)心感染的细胞，吸干净培养基，再用PBS洗一次；每孔加入30ul 0.25%的胰酶，37℃孵育(yu)5min，加入100ul完全培养基(ji)，继续培养。
4. 感染后继续培(pei)养(yang)3天(tian)（每天(tian)换液），进行luc检测，也可(ke)以观察(cha)eGFP荧光（根据情况(kuang)更(geng)换培养(yang)基(ji)）。
