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保种服(fu)务是指，通(tong)过在液(ye)氮中保存(cun)实(shi)验动物(wu)的(de)(de)配子或(huo)胚(pei)胎，从(cong)而实(shi)现以(yi)较小(xiao)的(de)(de)成本维持动物(wu)模型(xing)核心种群的(de)(de)方法。维通(tong)达通(tong)过冻存(cun)精子，胚(pei)胎或(huo)卵巢组(zu)织，需要时再复(fu)苏成活体动物(wu)，确保客户种质资源的(de)(de)安全。
1.胚胎(tai)冻存(cun)
胚(pei)胎(tai)冻存是安全(quan)的(de)(de)保(bao)存实(shi)验动物(wu)品系的(de)(de)方法。影响胚(pei)胎(tai)冷冻保(bao)存成功(gong)的(de)(de)三个(ge)重要方面(mian)包括：①胚(pei)胎(tai)的(de)(de)数(shu)量；②复苏(su)后存活(huo)胚(pei)胎(tai)的(de)(de)数(shu)量；③胚(pei)胎(tai)移植后存活(huo)的(de)(de)成年动物(wu)数(shu)量。
维通达建(jian)议(yi)客户每个品系冻存(cun)约200~300枚2cell、8cell或桑囊胚(pei)(pei)时期的(de)胚(pei)(pei)胎，每管30枚左右，即(ji)8~10管胚(pei)(pei)胎放入液氮中保存(cun)。胚(pei)(pei)胎的(de)来源，既可以通过超数排(pai)卵(luan)的(de)方法，或者(zhe)通过体(ti)外受精（IVF）的(de)方法获得(de)。当(dang)然，也可以与品系净化结(jie)合起来，这(zhei)样可以节约获得(de)足(zu)量数目胚(pei)(pei)胎的(de)准备成本。
该技术的流(liu)程包括：
①胚胎(tai)(tai)采集。维通达建议(yi)冻存2-cell胚胎(tai)(tai)。若2-cell胚胎(tai)(tai)复苏效果不佳，再(zai)考虑冻存8cell或桑囊胚时期的胚胎(tai)(tai)。
②胚胎清(qing)洗。我们采用国际(ji)胚胎移植协(xie)会的建(jian)议(yi)方案进行清(qing)洗，目的是防(fang)止胚胎被(bei)微(wei)生物感染。
③胚胎冻存(cun)。采用(yong)玻璃化冷冻进(jin)行，按照标准的流程经(jing)过冻存(cun)保护液处理后，投入(ru)液氮保存(cun)。
④复苏验(yan)证。冻存一周(zhou)后，我们(men)取出(chu)1支验(yan)证管的胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)进(jin)行复苏，若(ruo)胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)存活(huo)率和囊胚(pei)发育率20~100%（野生(sheng)型B6小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)复苏率在80%以上(shang)，不同品(pin)系间存在差异），或(huo)胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)移植后有健(jian)康小(xiao)鼠出(chu)生(sheng)，表明胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)冷冻保存成功。若(ruo)2-cell复苏存活(huo)率小(xiao)于(yu)50%，我们(men)会及时与客户沟通，更改(gai)为8-cell或(huo)桑囊胚(pei)期胚(pei)胎(tai)(tai)(tai)冻存。
⑤长期保存(cun)。验证保存(cun)成功(gong)的品系，放入专用的胚胎保存(cun)液氮(dan)罐中（一(yi)般(ban)分布于(yu)2个液氮(dan)罐），长期保存(cun)。
2.精子冻存
精(jing)(jing)子(zi)冻存，在保(bao)种(zhong)服(fu)务中(zhong)广(guang)泛应用，其优势在于(yu)技术(shu)成熟，成本低，容(rong)易操作(zuo)等特(te)点。通过(guo)无菌手(shou)术(shu)分离(li)可育雄鼠的附睾(gao)，在特(te)定的溶液(ye)进(jin)行精(jing)(jing)子(zi)的游离(li)，并加入专用的冷(leng)(leng)冻保(bao)护液(ye)，通过(guo)麦(mai)管(guan)冷(leng)(leng)冻保(bao)存在液(ye)氮(dan)中(zhong)。
建议客户每个品系(xi)提供(gong)2~3只12周至(zhi)4月(yue)龄的可育成年(nian)小(xiao)鼠，冻存15~20支麦管的精液。
3.品系恢(hui)复
在基因(yin)修饰(shi)动(dong)物(wu)模(mo)型的使(shi)用过程(cheng)中，由于(yu)各(ge)种(zhong)原因(yin)造成(cheng)该品(pin)系(xi)的繁育(yu)出(chu)现(xian)障碍，如(ru)由于(yu)老(lao)龄化(hua)造成(cheng)精子(zi)活力的降低，或由于(yu)疾病(bing)或意(yi)外(wai)造成(cheng)繁育(yu)期动(dong)物(wu)生命垂危，这时可以通过维通达提(ti)供胚胎复苏(su)、精子(zi)复苏(su)，或者辅(fu)助生殖技术(shu)进(jin)行动(dong)物(wu)品(pin)系(xi)的恢复。
（1）胚胎复苏(su)
冻存(cun)的(de)胚胎按照标(biao)准程序复苏(su)后(hou)，移植(zhi)到代孕(yun)大(da)小鼠的(de)输卵管(guan)或(huo)子宫内，得(de)到活体后(hou)代的(de)过(guo)程。
（2）精(jing)子复苏(su)
体外(wai)(wai)受(shou)精是指将成熟的(de)(de)(de)卵子和获能(neng)的(de)(de)(de)精子在体外(wai)(wai)进行受(shou)精的(de)(de)(de)过程(cheng)。维通达有丰富的(de)(de)(de)作体外(wai)(wai)受(shou)精的(de)(de)(de)经验，建议精子活力大(da)于30%时，直接采(cai)用体外(wai)(wai)受(shou)精方(fang)法(fa)复(fu)苏后代(dai)。
（3）辅(fu)助透明带切(qie)开体外受精
辅助透明(ming)带切开是指获得(de)的(de)精(jing)子活力小(xiao)于30%时(shi)，精(jing)子不(bu)(bu)能(neng)顺利穿(chuan)过透明(ming)带，采(cai)用(yong)传统的(de)方法(fa)不(bu)(bu)能(neng)得(de)到受精(jing)卵时(shi)，对卵母细胞的(de)透明(ming)带进行(xing)打孔或(huo)切开，从而(er)获得(de)受精(jing)卵的(de)方法(fa)。维(wei)通达可(ke)以采(cai)用(yong)Xyclone激光破(po)膜仪进行(xing)透明(ming)带打孔，或(huo)者(zhe)用(yong)专(zhuan)用(yong)的(de)尖针将透明(ming)带切开，两种方法(fa)均可(ke)得(de)到较高的(de)受精(jing)率。
