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扩繁

目前小鼠品系(xi)(xi)已(yi)达上万种,大鼠品系(xi)(xi)也超过上千种,这些(xie)品系(xi)(xi)的(de)(de)繁(fan)殖性(xing)能千差万别(bie),需要根(gen)据(ju)具体品系(xi)(xi)的(de)(de)特点,针对(dui)性(xing)的(de)(de)优化(hua)种群(qun)管理方案。依托20年的(de)(de)大小鼠种群(qun)管理经验和完善的(de)(de)动物设(she)施质(zhi)控体系(xi)(xi),维通达可以根(gen)据(ju)客户需要,制定合适的(de)(de)扩(kuo)(kuo)繁(fan)方案,提供品系(xi)(xi)建立、常规扩(kuo)(kuo)繁(fan)、快速扩(kuo)(kuo)繁(fan)和活体保种等专业(ye)服务。

 

1. 品系建立

大小鼠(shu)(shu),按(an)照育种(zhong)方式(shi)不同,分为(wei)(wei)近交(jiao)系(xi)和(he)封闭群(qun)。JAX将遗传背景不清楚的(de);或(huo)者首建鼠(shu)(shu)(Founder)来源于3种(zhong)或(huo)以上(shang)品(pin)系(xi);或(huo)者首建鼠(shu)(shu)是远(yuan)交(jiao)系(xi)(Outbred),统称为(wei)(wei)群(qun)(STOCK)。比如,STOCK按(an)照全同胞兄妹(mei)交(jiao)配(pei)(pei)20代之(zhi)(zhi)前,仍称为(wei)(wei)STOCK;兄妹(mei)交(jiao)配(pei)(pei)20代之(zhi)(zhi)后(hou),称为(wei)(wei)近交(jiao)系(xi)(Inbred)。


术语

定义和说明(ming)

STOCK(群(qun))

一(yi)个独立的繁育群体。

Line(系)

谱(pu)系明确(que)的一群动物,且来源于同一父母。

Inbred strain(近交(jiao)系)*

至少连续20代兄(xiong)妹交(jiao)配培育而(er)成的品系(xi)。所有(you)动物(wu)都可(ke)追溯于(yu)同2只首建鼠(shu)。

Subline(亚系)

按照近交系(xi)标准(zhun)独立(li)于(yu)原近交系(xi)繁育的一群小鼠(shu)。如许多常见近交系(xi)的亚(ya)系(xi)(C57BL/6J,   C57BL/6N)。

Coisogenic(同类(lei)系)

有一(yi)个(ge)基因(yin)改变的(de)(de)近(jin)(jin)交系。如许多(duo)在(zai)近(jin)(jin)交系上进行基因(yin)修饰(shi)操(cao)作(zuo)后获得的(de)(de)品(pin)系。

Inbred substrain(近交(jiao)亚系)*

按照(zhao)近(jin)交(jiao)系标准繁(fan)育20代的亚系,或者已经(jing)明确与近(jin)交(jiao)系的遗(yi)传区别(甚至是1个基(ji)因的区别)。

对(dui)于随机转基因(yin)和(he)CRISPR技术产生的敲除鼠,由于插入(ru)位(wei)点/删除碱基数(shu)/拷(kao)贝数(shu)的不同(tong),每一只founder(F0)的基因(yin)和(he)表型可(ke)能不同(tong)。维通达(da)可(ke)以(yi)为客户提供标(biao)准的品(pin)系建(jian)立服务,筛选到符合(he)实(shi)验需要(yao)的基因(yin)编辑(ji)模型(品(pin)系,见下图,源(yuan)于JAX)。


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2. 快速扩繁

采用超数排卵的(de)方法(fa)获得卵母细胞,通(tong)过(guo)新鲜或(huo)冷冻精子(zi)进(jin)行体外受精(IVF),将2-cell时期的(de)受精卵胚(pei)胎移植(zhi)到代(dai)孕小鼠(shu)体内,一(yi)代(dai)获得大量(liang)子(zi)代(dai)小鼠(shu)的(de)过(guo)程。


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(1) 快速扩繁服务优点:

-只需(xu)要提供精子(zi)或少量雄性小鼠;

-6~12周(zhou)即可提供大量同批次后(hou)代;

-基因敲(qiao)除(chu)或CKO小(xiao)鼠繁(fan)育周(zhou)期缩短(duan)30~50%。


序号

仔鼠数量

快速扩繁时间

传统扩繁时间

1

30只后代(dai)

6周(zhou)

24周

2

50只后代

6~8周

24周

3

100只后代

8~10周

32周

4

150只后代

8~12周(zhou)

40周

5

200只后代

8~12周(zhou)

46周

*数(shu)据源于B6背景(jing)小鼠


(2)科学经济扩繁方案制定:

按照计(ji)(ji)划扩(kuo)繁(fan)(fan),获(huo)得(de)足够数量的大(da)小鼠模(mo)型,是确保实验进行的前提(ti)。维(wei)通达主要依(yi)据大(da)小鼠的扩(kuo)繁(fan)(fan)性能(neng)(neng)和行业(ye)认可的扩(kuo)繁(fan)(fan)性能(neng)(neng)计(ji)(ji)算(suan)公式(shi),制定科学(xue)经济的扩(kuo)繁(fan)(fan)方案。

(1)基本生理参数:

-小鼠(shu)6~8周(zhou)左(zuo)右(you)性成熟(shu),大鼠(shu)8~10周(zhou)左(zuo)右(you)性成熟(shu)

-小鼠孕期约3周(zhou)(19~21天);大鼠孕期约3.2周(zhou)(22~25天)

-首(shou)胎(tai)间隔4~6周。

-小鼠传(chuan)一(yi)代需(xu)要3个月左右(you)。

(2)影响(xiang)扩繁速度的雌雄鼠(shu)因(yin)素:

①雄鼠,精子数量多,只要(yao)具(ju)有受(shou)精能力,一般不是限速(su)因素;

②雌鼠,孕期3周(zhou),哺(bu)乳3~4周(zhou),窝间隔(ge)一般(ban)1.5~2个月,常常是限速(su)因素。

(3)基因型杂合鼠的快速扩繁

使用基因(yin)阳(yang)性(xing)的(de)雄鼠,与同背景(jing)的(de)野生雌鼠卵(luan)(超排获得卵(luan))作IVF快(kuai)速扩繁,2个月左右即可(ke)获得100只以上的(de)后(hou)代(根据实验(yan)需要,移植对(dui)应数(shu)量的(de)受精卵(luan)2-cell期(qi)胚(pei)胎(tai))。

(4)基因型(xing)纯合(he)的快速(su)扩(kuo)繁

如果有大量的(de)纯(chun)(chun)合(he)基因(yin)阳(yang)性雌(ci)鼠(shu)(shu),可以直接自然扩(kuo)繁或作IVF扩(kuo)繁。一般(ban)情况下没有纯(chun)(chun)合(he)或杂(za)合(he)的(de)基因(yin)阳(yang)性雌(ci)鼠(shu)(shu),只能(neng)使用野生(sheng)型雌(ci)鼠(shu)(shu)超排(pai),作IVF获得F1杂(za)合(he)后代;然后到F2代才能(neng)获得纯(chun)(chun)合(he)鼠(shu)(shu)。

(5)多(duo)基因快速扩繁

由(you)于(yu)快(kuai)速扩繁,依赖(lai)于(yu)订(ding)购大量的野生型(xing)同背景雌鼠(shu)获取卵(luan)进行IVF,即在1代时(shi)间内可以获得大量的杂合(he)小(xiao)鼠(shu)。对(dui)于(yu)多基因扩繁,情况会(hui)比较复杂多样(yang),会(hui)根(gen)据客户需求(时(shi)间和(he)成本),提供适合(he)的方(fang)案。


3.活体保种

若短(duan)时间内不(bu)用(yong)大(da)小(xiao)鼠模型,也可(ke)以(yi)小(xiao)规模的活体保种(zhong)(zhong)。根据发育性能,基(ji)因型,繁(fan)育周期,进(jin)行科学的留种(zhong)(zhong)和换种(zhong)(zhong)计划,避免出现不(bu)育,以(yi)最小(xiao)的笼位数维(wei)持种(zhong)(zhong)群(qun)。一般小(xiao)鼠2~4笼;大(da)鼠3~5笼进(jin)行活体保种(zhong)(zhong)。


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