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净化

品系净化(hua)是(shi)指,通过特(te)定处理(li),消除病毒、细(xi)菌(jun)和寄生虫,得到(dao)SPF级(ji)别(bie)动(dong)物(wu)的服务。维(wei)通达通过胚(pei)胎清洗和胚(pei)胎移植的方式,获得SPF级(ji)别(bie)的动(dong)物(wu);同时(shi)委托(tuo)第三方提(ti)供相(xiang)关微生物(wu)检测(ce)服务,出具相(xiang)关检测(ce)合格报告。


1.服务(wu)类别

净(jing)化(hua)(hua)(hua)服务(wu),根据饲(si)养(yang)环境不同分为两类:IVC净(jing)化(hua)(hua)(hua)和(he)隔离器(qi)净(jing)化(hua)(hua)(hua)。根据净(jing)化(hua)(hua)(hua)级别,使(shi)用(yong)的(de)代(dai)孕鼠和(he)净(jing)化(hua)(hua)(hua)方案(an)、设施均不同。常用(yong)的(de)净(jing)化(hua)(hua)(hua)标准(zhun)包(bao)括:(1)VAF/PLUS®;(2)GB-SPF;(3)VAF/ELITE®;(4)定(ding)制标准(zhun)。

根据基因型不同,可(ke)以分为(wei)纯合(he)净化(hua)或者杂合(he)净化(hua)。纯合(he)净化(hua)需(xu)要准备一定数量,基因型均为(wei)纯合(he)的雌鼠和雄(xiong)鼠;杂合(he)净化(hua)只需(xu)要提供基因型符合(he)需(xu)要的2~3只可(ke)育(yu)雄(xiong)鼠即可(ke)。


2.服务简介

胚(pei)胎净化(hua)的(de)(de)目的(de)(de)是获得无特定(ding)病(bing)原体(ti)(ti)(Specific pathogen Free, SPF)动(dong)物,即(ji)体(ti)(ti)内(nei)(nei)无特定(ding)的(de)(de)微(wei)生物和寄(ji)生虫(chong)(chong)存在的(de)(de)动(dong)物。常用(yong)的(de)(de)方(fang)(fang)法包括剖(pou)腹产和胚(pei)胎移植,但(dan)由于剖(pou)腹产不能消(xiao)除垂直传播的(de)(de)病(bing)毒(du)(如鼠巨(ju)细胞(bao)病(bing)毒(du)MCMV;淋巴细胞(bao)性脑(nao)膜炎病(bing)毒(du)LCMV和脑(nao)胞(bao)内(nei)(nei)原虫(chong)(chong)ECUN),且(qie)对于手术设施(shi)依赖(lai)程度较(jiao)大,目前通过胚(pei)胎移植的(de)(de)方(fang)(fang)法,消(xiao)除病(bing)毒(du)、细菌和寄(ji)生虫(chong)(chong),是易行的(de)(de)品系(xi)净化(hua)方(fang)(fang)法。


胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)净(jing)(jing)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)原(yuan)理(li)(li),是(shi)发育早期游离(li)状态的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)有(you)(you)透(tou)(tou)明带,可以(yi)防止细菌、寄生虫和(he)大(da)部(bu)分(fen)病(bing)毒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)侵袭;通过(guo)(guo)无(wu)限稀释(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法将透(tou)(tou)明带外面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生物含量降至极低的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)平(ping),移(yi)植(zhi)(zhi)到(dao)代孕的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)健康小(xiao)鼠(shu)体内后(hou),小(xiao)鼠(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)免疫系统会清(qing)除掉这(zhei)些(xie)微生物,而达到(dao)净(jing)(jing)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。国际胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)移(yi)植(zhi)(zhi)协会推荐的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)标准,是(shi)在(zai)特定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)养(yang)(yang)液(ye)微滴中进(jin)(jin)行10次清(qing)洗,每(mei)次大(da)约100倍的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)稀释(shi)。即便如此(ci),仍有(you)(you)净(jing)(jing)化(hua)失败的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)风险,例如,鼠(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)细小(xiao)病(bing)毒(MMV),有(you)(you)研究(jiu)发现(xian)其可以(yi)通过(guo)(guo)透(tou)(tou)明带进(jin)(jin)入胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)内部(bu);有(you)(you)时(shi)采(cai)(cai)用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)是(shi)通过(guo)(guo)体外受精(IVF),或(huo)透(tou)(tou)明带受到(dao)破(po)坏(huai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(如冷(leng)冻(dong)、解(jie)冻(dong)),这(zhei)些(xie)情况需(xu)要采(cai)(cai)用(yong)不(bu)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)策略(lve)。研究(jiu)发现(xian),通过(guo)(guo)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)移(yi)植(zhi)(zhi)进(jin)(jin)行净(jing)(jing)化(hua),胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)获(huo)取(qu)(qu)方(fang)法(雌鼠(shu)和(he)雄鼠(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)准备)和(he)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)处理(li)(li)(洗涤和(he)培(pei)(pei)养(yang)(yang))策略(lve),会影(ying)响胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)净(jing)(jing)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)结果[1~4]。胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)获(huo)取(qu)(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法中,采(cai)(cai)用(yong)雄鼠(shu)(携带病(bing)原(yuan)体)与(yu)同(tong)品系雌鼠(shu)(SPF)交(jiao)配(pei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法获(huo)得胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai),后(hou)代净(jing)(jing)化(hua)污染病(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)风险很低;可以(yi)不(bu)需(xu)要对胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)进(jin)(jin)行微生物分(fen)析,即杂(za)合(he)净(jing)(jing)化(hua)[2]。胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)处理(li)(li)常用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法是(shi)多次洗涤和(he)一定时(shi)间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)养(yang)(yang)[1,3]。若胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)是(shi)通过(guo)(guo)IVF,或(huo)透(tou)(tou)明带受到(dao)破(po)坏(huai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(如冷(leng)冻(dong)、解(jie)冻(dong)),需(xu)要对胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)(tai)培(pei)(pei)养(yang)(yang)液(ye)进(jin)(jin)行分(fen)析,以(yi)确认是(shi)否有(you)(you)病(bing)原(yuan)微生物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)污染,这(zhei)些(xie)净(jing)(jing)化(hua)后(hou)代需(xu)要每(mei)窝(wo)分(fen)别检测[4]。


为了确保净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)成(cheng)功,需要对(dui)净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)流程进(jin)(jin)(jin)行标准化(hua)(hua)(hua)(hua)控制(见图示)。①净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)前,对(dui)净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)品(pin)系的(de)病原感染情况进(jin)(jin)(jin)行评(ping)估,如对(dui)清洗胚(pei)胎(tai)的(de)溶(rong)液进(jin)(jin)(jin)行Q-PCR分(fen)析,确认(ren)病毒(du)含量(liang);②净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)时,净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)品(pin)系与SPF野生雌鼠(shu)交配获取胚(pei)胎(tai),降低病毒(du)通(tong)过透明带进(jin)(jin)(jin)入胚(pei)胎(tai)的(de)概率;③净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)后,对(dui)哨兵鼠(shu)或(huo)净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)大小鼠(shu)进(jin)(jin)(jin)行微生物(wu)检测(ce)确认(ren)病原是否净(jing)(jing)化(hua)(hua)(hua)(hua)掉(diao)。由于从微生物(wu)感染到检测(ce)出来有一定(ding)的(de)潜伏(fu)期,因而(er)应(ying)根(gen)据(ju)具体(ti)的(de)情况制定(ding)相应(ying)的(de)策略。


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常用(yong)的(de)净(jing)化(hua)标(biao)准有GB-SPF、FELASA、VAF/PLUS®和VAF/ELITE®等(deng)。检(jian)测(ce)的(de)微生物(wu)项(xiang)目越多(duo),产生的(de)检(jian)测(ce)费(fei)用(yong)也(ye)会越多(duo)。但(dan)是对(dui)于特定研究而言,也(ye)不(bu)(bu)是检(jian)测(ce)的(de)项(xiang)目越多(duo)越好,应根据实际的(de)实验(yan)要求(qiu)选择(ze)相应的(de)标(biao)准。一般选择(ze)的(de)原则是:免疫缺(que)陷动(dong)物(wu)需(xu)要采用(yong)隔(ge)离器(qi)净(jing)化(hua)(排(pai)除环境(jing)菌(jun));非(fei)免疫缺(que)陷动(dong)物(wu)采用(yong)IVC净(jing)化(hua)即(ji)可(一般不(bu)(bu)需(xu)要排(pai)除环境(jing)菌(jun))。IVC净(jing)化(hua)的(de)代(dai)孕母鼠(shu)来自于屏(ping)障设施,隔(ge)离器(qi)净(jing)化(hua)代(dai)孕母鼠(shu)来自于隔(ge)离器(qi),后者购(gou)鼠(shu)费(fei)用(yong)和饲养(yang)费(fei)用(yong)较高(gao),特别是对(dui)于特殊品(pin)系,1个品(pin)系就需(xu)要使用(yong)1个隔(ge)离器(qi)3~4个月时(shi)间。我(wo)们可根据客户需(xu)求(qiu)增(zeng)加检(jian)测(ce)项(xiang)目,费(fei)用(yong)根据检(jian)测(ce)项(xiang)目增(zeng)减。

通(tong)常情况下获得符合健康(kang)标准的动物(wu)模(mo)型,就可以排除微(wei)生(sheng)物(wu)的干扰,进(jin)行扩繁或开始正式(shi)的实验。


参考文献:

[1] Risks of transmissible diseases in relation to embryo transfer. Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 439–450

[2] Embryo Transfer Rederivation of C.B-17/Icr-Prkdcscid Mice Experimentally Infected with Mouse Parvovirus 1. Comparative Medicine. Vol 58, No 4 August 2008 Pages 353–359

[3] Rederivation by Embryo Transfer in Strains of Laboratory Mice and Rats. Russian Journal of Genetics: Applied Research. 2013, Vol. 3, No. 4, pp. 305–315

[4] www.jax.org/jaxmice/health Aligning Health Surveillance and Risk in Embryo Transfer, Embryo wash testing.

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