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维通达公司拥(yong)有4种主(zhu)要(yao)基因(yin)修饰技术，可根据您(nin)的实验(yan)要(yao)求，量身设(she)计(ji)方案，采用(yong)合适(shi)的编辑方法，准确，高效的制备(bei)目标动物模型。
ES细胞是全能胚(pei)胎干(gan)细胞，该细胞可以通(tong)过胚(pei)胎嵌合(he)，获得ES细胞来(lai)源的小(xiao)鼠(shu)。因(yin)此可以在ES上(shang)进行(xing)基(ji)(ji)因(yin)编(bian)辑(ji)，获得基(ji)(ji)因(yin)修饰小(xiao)鼠(shu)。该方法在CRISPR等技术出现之前，是主流获得靶向基(ji)(ji)因(yin)修饰小(xiao)鼠(shu)的方法。
技术一般的流程
载体构建→ 电转ES→ 克隆(long)鉴(jian)定→ 嵌合鼠制备→ ES小鼠获(huo)得
图1 经(jing)典ES打靶制备基因修饰小(xiao)鼠(shu)模型流程，目前维通达可提供(gong)2种遗传背景的小(xiao)鼠(shu)ES细胞：C57BL/6，B6;129。
EPS细(xi)(xi)胞是一(yi)种全(quan)能性比普通ES更(geng)高的(de)(de)(de)干(gan)细(xi)(xi)胞。相比于(yu)普通ES具有(you)种系传递能力(li)强，打靶(ba)效率(lv)高的(de)(de)(de)特(te)点。它(ta)可以有(you)效缩短(duan)基因(yin)小鼠制备(bei)周期，降低制备(bei)费用。在制备(bei)基因(yin)敲(qiao)入(ru)，条(tiao)件(jian)敲(qiao)除方面，效率(lv)显著高于(yu)CRISPR法，更(geng)为(wei)重要(yao)的(de)(de)(de)是不受敲(qiao)入(ru)片段大小限制，是一(yi)种新型高效的(de)(de)(de)基因(yin)修饰大小鼠制备(bei)策(ce)略。
图1 EPS制备基因修饰小鼠流程图。
技术优势(shi)或适合(he)应用的研(yan)究(jiu)
-在制备基因敲入，条件敲除方面，效率显著高于CRISPR/Cas9法。
-更为重要的是不受敲入片段大小限制。
-对于需要多次打靶的复杂动物模型，制备周期更短。
ES VS. EPS细胞打靶技术
EPS：维通达研究EPS技术，成(cheng)功将(jiang)EPS应(ying)用于(yu)基因(yin)编辑(ji)小鼠快速制备(bei)中，EPS是潜(qian)能拓展的多功能干细胞，2017年在(zai)cell上发表该项研究成(cheng)果，期刊号：169(2):243-257.e25.
-ES打靶效率一般在百万分之一的级别，与之相比，EPS基因打靶效率提高几十倍到上百倍。
-同时EPS因为更高的全能性，具有更强的种系传递能力，低至1颗EPS细胞，就可一步获得嵌合效率接近100%的ES小鼠，省去种系传递过程（三个月）。
-与CRISPR辅助技术相比，使用EPS细胞不再受限于敲入片段大(da)小，周期(qi)可控，结(jie)果可预测。
EPS和(he)ES策略流程：
CRISPR/Cas9能够(gou)靶向(xiang)基(ji)因(yin)(yin)组的(de)特定序列，并(bing)且将DNA双链(lian)打断，引发(fa)非同(tong)(tong)源(yuan)末(mo)端修(xiu)(xiu)复，提高同(tong)(tong)源(yuan)重组修(xiu)(xiu)复效(xiao)率。可用于基(ji)因(yin)(yin)敲(qiao)除，小(xiao)片段基(ji)因(yin)(yin)敲(qiao)入和基(ji)因(yin)(yin)条(tiao)件敲(qiao)除等基(ji)因(yin)(yin)编辑(ji)。
技术一般(ban)的流程
载(zai)体构建(jian)→设计(ji)制(zhi)备gRNA→微(wei)注射→出生小鼠检(jian)测→阳(yang)性小鼠获得。
技术优(you)势或适(shi)合应用的研究
-高效率基因敲除，双gRNA策略能够删除大片段DNA，从几十bp到Mb，几乎没有长度限制。
-基因敲入严重依赖片段长度，1kb以上，敲入效率急剧下降。
-点突变等小范围基因编辑效率高。
成功案例
图(tu)1 双gRNA切割，片段敲除基(ji)因(yin)方(fang)案设计。
图2 两个Grna切割(ge)位点之(zhi)间的(de)~550bp基因序列被高效率敲除(chu)，相对于野生(sheng)带(dai)773bp，发生(sheng)敲除(chu)的(de)鼠(shu)PCR产(chan)生(sheng)~220bp的(de)条带(dai)。
脂质体细胞转(zhuan)基(ji)(ji)因(yin)(yin)方法是(shi)常(chang)(chang)用(yong)(yong)的方法，但对于一些肿瘤(liu)细胞系，效率极低。病(bing)(bing)(bing)毒(du)转(zhuan)基(ji)(ji)因(yin)(yin)成为有(you)(you)效的替代方案，常(chang)(chang)用(yong)(yong)的有(you)(you)慢病(bing)(bing)(bing)毒(du)，腺病(bing)(bing)(bing)毒(du)方法.慢病(bing)(bing)(bing)毒(du)会把外源基(ji)(ji)因(yin)(yin)整(zheng)合到细胞，常(chang)(chang)用(yong)(yong)来建立(li)转(zhuan)基(ji)(ji)因(yin)(yin)细胞系、细胞荧光(guang)标记等(deng)用(yong)(yong)途。腺病(bing)(bing)(bing)毒(du)不整(zheng)合到基(ji)(ji)因(yin)(yin)组,可以(yi)用(yong)(yong)来瞬时转(zhuan)染细胞。腺病(bing)(bing)(bing)毒(du)制备较慢病(bing)(bing)(bing)毒(du)复杂，周期长。
图1 通过慢(man)病毒,把luciferase转到Raji细胞,建立(li)稳转细胞系。
